Пренатальная диагностика хромосомных заболеваний у плода методами амнио-ПЦР и FISH

 493
prenatalnaya-diagnostika-xromosomnyx-zabolevanij-u-ploda-metodami-amnio-pcr-i-fish

Пренатальная (или дородовая) диагностика направлена на выявление заболеваний у будущего ребенка, до его рождения в утробе матери. Большая часть из них (95%) — это изменения в количестве хромосом.

Пренатальная диагностика делится на два вида — инвазивную и неинвазивную. «НЕ инвазивный» значит без проникновения через кожу или слизистые оболочки. К ним относится УЗИ и анализ крови. К «инвазивным» принадлежат все другие способы получения материала для анализа — кровь и клетки плода или плацента.

Хромосомы — переносчики информации о том каким будет ребенок. От каждого родителя плод получает по 23 хромосомы, их которых 22 ответственны за строение и функцию всех органов, а еще одна отвечает за пол. Таким образом, у здорового плода должно быть 46 хромосом (по 23 от папы и от мамы и 2 половые — если ХХ — девочка, если ХY — мальчик).

Хромосомные болезни:

На диагностику хромосомных заболеваний нацелены все биохимические скрининги в первом и втором триместрах (бета-ХГЧ, PAPP-A, эстриол свободный, АФП). Кроме них  оценивают другие факторы повышенного риска хромосомных синдромов:

  • аномалии на УЗИ
  • возраст матери более 35 лет
  • психологический стресс у матери, патологический страх рождения больного ребенка

prenatalnaya-diagnostika-xromosomnyx-zabolevanij-u-ploda-metodami-amnio-pcr-i-fish

Для инвазивной пренатальной диагностики проводят взятие материала у плода следующими способами:

  • ворсины хориона (предшественник плаценты) — между 10 и 13 неделями беременности
  • околоплодная жидкость — на 12-15 неделях беременности, под контролем УЗИ через брюшную стенку вводится тонкая игла берется 10 околоплодной жидкости, содержащей  клетки плода
  • кордоцентез — кровь из пупочной артерии
  • фетоскопия — взятие тканей плода

Материал отправляется на цитогенетический анализ в генетическую лабораторию. Часть  материала используют для цитогенетического анализа — посева на специальные среды для последующего детального исследования всех хромосом, которое длится 2-3 недели. Другую часть исследуют методами амнио-ПЦР или FISH.

Количественная флюоресцентная ПЦР или амнио-ПЦР (англ. quantitative fluorescent polymerase chain reaction, QF-PCR)  и флуоресцентная гибридизация in situ (англ. fluorescence in situ hybridization, FISH) на протяжения 24-48 часов позволяют получить ответ о наличии наиболее частых хромосомных аномалий у плода — трисомии по 21, 18, 13 хромосомам, синдромы Тернера и Кляйнфельтера.

Метод количественной флюоресцентнной ПЦР в пренатальной диагностике

Образец ДНК амплифицируются при помощи ПЦР с флюоресцентно меченными праймерами. Полученные продукты сепарируют и квантифицируют на автоматическом генетическом анализаторе.

Методика не заменяет традиционный цитогенетический анализ, поскольку не включает в себя исследование всего набора хромосом, ее главное преимущество — время получения результата.

По сравнению с FISH тест QF-PCR выявляет возможное загрязнение тканями матери образца и требует меньшего объема материала. Выявляет и частичную трисомию или моносомию, унипариетальную дисомию.

prenatalnaya-diagnostika-xromosomnyx-zabolevanij-u-ploda-metodami-amnio-pcr-i-fish

Метод флуоресцентной гибридизации in situ в пренатальной диагностике

К клеткам плода добавляется флюресцентно-меченная ДНК (зонд), которая встраивается в хромосомы. Затем делают мазок и под флюресцентным микроскопом оценивают число сигналов из ядра.

Метод FISH широко распространен. 

Недостатки амнио-ПЦР и FISH в пренатальной диагностике

  • не способна диагностировать все виды хромосомных аномалий
  • не заменяет классический цитогенетический анализ

Показания для пренатальной диагностики хромосомных аномалий у плода методами амнио-ПЦР и FISH

  • высокий риск (более 1:100) аномалии плода по результатам биохимического скрининга или УЗИ
  • риск продления при культивирования после 21 недели беременности
  • врожденный порок сердца у плода
  • высокий психический стресс беременной

prenatalnaya-diagnostika-xromosomnyx-zabolevanij-u-ploda-metodami-amnio-pcr-i-fish

Материал для исследования

  • околоплодная жидкость — 2-4 мл в стерильной пробирке, при возможности без контаминации кровью матери
  • ворсины хориона — минимум 2 ворсины с различных мест хориона (около 10-20 мг), для снижения риска ложного диагноза в результате плацентарного мозаицизма, в стерильной лабораторной посуде с транспортной средой
  • клетки плода полученные при кордоцентезе
  • клетки плода полученные при фетоскопии
  • мазок букальной слизистой матери — проводится перед амниоцентезом или хориоцентезом для сравнения алельньго профиля матери и плода, исключения контаминации образца околоднодной жидкости клетками матери

Условия хранения материала

  • 4-8 °C, доставить в лабораторию немедленно после взятия материала
Читайте также:  Этапы дифференциального диагноза
Комментарии (0)

Комментариев нет, будьте первым!

Написать комментарий

68 queries in 1,005 seconds.